一,、血管內(nèi)皮細胞鑒定

　　在操作過程中，可能混入成纖維細胞平滑肌細胞,。鑒定血管內(nèi)皮細胞基礎是根據(jù)他自身的形態(tài),、性質(zhì)。內(nèi)皮細胞有三個顯著特點：①形態(tài)學呈單層鋪路石樣排列,，如前所述;②電子顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)Weibel-Palade小體;③存在第Ⅷ因子關連抗原(VWF),，用免疫法測定為陽性反應。此外,，在硬化血管取材時,，巨噬細胞轉(zhuǎn)化的泡沫細胞可能混入，除形態(tài)學的差異外,，泡沫細胞含有豐富的氧化修飾的LDL,，氧化LDL與相應抗體反應后在熒光顯微鏡下極易區(qū)別。

　　二,、平滑肌細胞的鑒定

　　如前所述,，平滑肌細胞除形態(tài)、排列有其自身特點外,，重要一點是胞漿內(nèi)有很多與細胞縱軸平行的肌絲及與其相連的致密體,。在培養(yǎng)時，對正常組織而言,，主要混有成纖維細胞,，內(nèi)皮細胞,。能夠準確識別其中一、二類細胞,，其他細胞也就不難鑒別了,。

　　三、常用的鑒定方法和條件

　　細胞鑒定法一般有細胞形態(tài)學觀察法,、免疫化學技術觀察法,、活細胞直接觀察法和培養(yǎng)細胞生物化學性狀檢測。

　　1.細胞一般形態(tài)學觀察法

　　常用方法有兩種,，一是用普通顯微鏡,，將細胞固定，染色后觀察;二是用電子顯微鏡將組織細胞切片,、固定,、包埋后觀察。

　　2.免疫化學技術觀察法

　　免疫細胞化學技術是用熒光素或酶等標記物或顯示物標記特異性抗體,，通過免疫學中的抗原抗體反應與細胞內(nèi)的相應抗原結(jié)合,，形成帶有熒光素或顯色物的抗原抗體復合物，用熒光顯微鏡或普通顯微鏡觀察復合物存在與否,，達到鑒別細胞的目的,。這一技術包括標本處理(制備、保存,、固定等),，染色和結(jié)果判斷。

　　3.活細胞直接觀察法

　　細胞培養(yǎng)法可直接觀察活細胞,，是組織培養(yǎng)技術的一個突出優(yōu)點,。培養(yǎng)的活細胞在一般顯微鏡下，由于細胞透明,，反差很少,，不易看清細胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)，因此這一技術需要采用相差顯微鏡,。較新的顯微攝影術(time-lapse cinemicrophotagraphy,TLCM)是直接記錄活細胞動態(tài)變化最為理想的方法,，能記錄細胞連續(xù)動態(tài)變化過程，具有客觀性和示教性,。

　　4.培養(yǎng)細胞生物學性狀檢測

　　觀察細胞在體外培養(yǎng)過程中,，從初代培養(yǎng)開始，到繼續(xù)培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)必須每天進行常規(guī)觀察細胞是否有污染,，生長狀況,，培養(yǎng)液是否需要更換，這是保證實驗成功的基礎,。所謂生物性狀檢測包括上述三種方法的運用,，這里主要談以下幾個方面：①形態(tài)學觀察,，培養(yǎng)的細胞可能每日每時都會發(fā)生形態(tài)改變,，形態(tài)觀察又包括一般形態(tài)學觀察,，超微結(jié)構(gòu)觀察如亞細胞器微絨毛的形態(tài)，微絲微管,，核仁的形態(tài)和數(shù)量排列分布狀況等;②細胞增殖生長觀察,，包括細胞計數(shù)，計數(shù)細胞是測定細胞絕對增長數(shù)量常用最簡便的方法;細胞分裂指數(shù)(mitotic index,MD)即細胞分裂指數(shù)=細胞分數(shù)相數(shù)/1000細胞×100,。計算分裂相時要注意掌握確定分裂相標準,，其中主要是確定好劃分間期和前期、末期和間期等的界限,。另外,，還有兩個指標即接種存活率和克隆形成率，細胞接種存活率=形成克隆數(shù)/接種細胞數(shù)×100,，細胞數(shù)接種率=貼壁存活細胞數(shù)/接種細胞數(shù)×100;③其他觀察,，如癌細胞具有浸潤性生長能力，這一能力是檢測癌細胞的指標,。

　　總之,，動脈粥樣硬化是多因素、多細胞相互作用的結(jié)果,，細胞培養(yǎng)是研究這一疾病最有效方法之一,。不同的動物血管組成、性質(zhì)不同;不同研究者有不同的實驗目的,，所采用的方法也不盡相同,。這里只是將血管內(nèi)皮細胞和血管中膜平滑肌細胞的培養(yǎng)和鑒定作一扼要敘述，隨著研究的深入,，方法和手段也會不斷改進和發(fā)展,。

　　(黃俊軍　周新)