免疫化學方法是利用抗原與其相應抗體具有特異結合的特性,，用熒光素、酶,、發(fā)光素,、同位素、膠體金標記某種抗原的抗體,，借助熒光顯微鏡、電鏡,、圖像分析儀,、同位素監(jiān)測儀、分光亮度儀便可對組織中的抗原進行定性或定量,，可用于膠原,、蛋白多糖、彈性蛋白,、粘連蛋白,、血漿成分的定位和定量分析。

　　1.抗原提取及單克隆抗體的制備(從略),。

　　2.抗體的標記：基本原理是將抗體與標記物以共價鍵結合,。

　　3.組織取材。

　　因為抗原組織容易降解和擴散，取材要及時和低溫操作,，取動脈壁冰凍切成4～8μm,，貼于玻片上立即干燥，用95%乙醇固定15min,，然后用0.5mol/l pH7.4 BPS洗1次,。

　　4.抗體染色

　　抗體染色是利用抗原與抗體特異性結合的原理，37℃30～60min,，間接法結合第二抗體,，37℃ 30～60min。每步間隔都用PBS pH7.4洗滌5～10min共洗3次,?？贵w染色方法有直接法、間接法,、補體法：

　　(1)直接法：標記抗體直接于組織中進行抗原結合反應,，用于鑒定未知抗原。

　　優(yōu)點：①結果判定簡單;②特異性強,，因反應過程中只有兩個因素,，與抗原交叉反應較少。

　　缺點：①不能鑒定未知抗原;②一種標記抗體只能檢測一種抗原;③敏感性差,。

　　(2)用已知未標記抗體與未知抗原相互結合或用未知抗體與已知抗原相互結合,，一定時間后洗掉未結合成分，加第二標記的抗體,。若第一步反應中有Ag-Ab的特異結合,，才會有第二步后續(xù)反應。

　　優(yōu)點：①既能檢查Ag又能檢查Ab;②標記一種抗體,，就能與一種以上的相應抗原結合鑒定多種抗原或抗體;③敏感性比直接法高,。

　　缺點：①參加反應因素多，易出現(xiàn)非特異性反應;②實驗方法復雜,。

　　(3)補體結合法：是標記補體抗體的方法,，第一步是將抗體和補體加入反應體系;第二步是加入標記補體抗體，若第一步有Ag-Ab反應,，補體抗體則可結合于補體上,。

　　5.染色定性定量分析

　　熒光素標記抗體可用熒光顯微鏡作定性分析。用顯微熒光分光光度計可定量,。酶標抗體可用普通顯微鏡定性,，也可定量。放射性同位素和發(fā)光素標記可用同位素檢測儀和發(fā)光計作定性,、定量分析,。

　　(孫續(xù)國)