一,、載脂蛋白測定方法

　　1.單向免疫擴散法(radialimmunodiffusion,RID)

　　該法較簡單，一般實驗室均可進行,。消耗較多的抗血清,，擴散過程至少24h，最多需72h,，測定下限值為10μg/ml,。該方法雖然簡單，應(yīng)嚴格控制有關(guān)條件如：含抗血清的瓊脂糖凝膠厚度要均勻;加入小孔的稀釋抗原(血清)量要準確;含ApoB的脂蛋白如VLDL和LDL顆粒大小不一,，如瓊脂糖凝膠濃度在1.5%～2.0%,可能僅測出LDL的ApoB,，大顆粒的LDL及VLDL的ApoB可能無法測出，因為難以穿過瓊脂糖凝膠的孔隙,。另外,，擴散過程中,，凝膠板一定要水平，否則易使擴散環(huán)呈橢圓形,，難以準確測量直徑,。一般使沉淀環(huán)以3.5～10.0mm為宜，應(yīng)在兩個方向測量直徑,，其精度要求達到0.1mm,。采用五種不同濃度參考值，測定沉淀環(huán)面積對相應(yīng)濃度關(guān)系以曲線回歸方程作圖,。

　　2.電免疫測定法(electroimmunoassay,EIA)

　　該法靈敏,，抗血清用量少，如瓊脂糖緩沖液中加入聚乙二醇及甘氨酸,，其電泳時間可縮短一倍,，火箭峰高以1～4cm為宜，火箭峰的測量可以計算面積或峰高,，峰高從中心量起。測量精度最好能在0.1mm,靈敏度約2μg/ml,，又稱為火箭電泳法,。

　　3.免疫比濁法(immunoturbidimetryassay,ITA)

　　簡便快速，在自動分析儀進行操作并能批量檢測,，是目前臨床使用最多的方法學,。免疫比濁法有兩種：一是測定光散射的，又名免疫散射比濁法(INA);需用特殊的激光濁度儀;另一種是利用光度計測定通過混濁溶液后的透光強度,，稱為透射免疫比濁法(ITA),，其靈敏度低于INA。比濁法可以終點法和速率法測定,，速率法是根據(jù)散射光強度與時間的關(guān)系,，以微機處理計算出抗原抗體復(fù)合物形成的最大反應(yīng)速度，后者與溶液中抗原量成正比,，?？稍?min內(nèi)完成測定過程，可自動扣除空白;終點法比速率法穩(wěn)定,，一般多用終點法,。

　　4.酶聯(lián)免疫法(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)

　　該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于極微量蛋白的定量測定，可測出ng級水平的抗原或抗體含量,，該法可用于ApoE,、C-Ⅱ、C-Ⅲ等含量較少的載脂蛋白的定量測定,。

　　5.放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)

　　該法靈敏,，抗血清用量少,，所需設(shè)備較多，一般用125I標記抗原作為示蹤物,，除ApoC-Ⅰ(不含酪氨酸)以外,，都可以作碘標記(氯胺T法)，以雙抗體法測定RIA法可檢測最低至3～5ng,。臨床檢驗中不常用此法,，主要用于動物實驗的科學研究工作。

　　還有熒光免疫法和化學發(fā)光法等靈敏度很高的方法,。

　　血清載脂蛋白測定的方法,，從測定原理、方法學評價及參考值,，劉秉文和李健齋等人作了大量的工作,，為國內(nèi)的載脂蛋白測定的臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。周新曾于1986年首先在國內(nèi)研制成功抗人ApoB100血清,，其后,，國內(nèi)同仁陸續(xù)研制出ApoAⅠ、AⅡ,、AⅣ,、E、CⅡ,、CⅢ抗血清,，并廣泛應(yīng)用于臨床的疾病診斷，在部分大醫(yī)院已成為常規(guī)檢查項目,。

　　劉秉文在“脂蛋白與動脈粥樣硬化“一書中全面總結(jié)了國內(nèi)外載脂蛋白測定的方法學及其參考值,，本節(jié)將引用如下比較表：

　　表18-1　ApoAⅠ免疫測定法的比較

　　RIAELISAEIARIDINAITA

　　抗體P，MP,，MPP,，MPP

　　靈敏度(n)0.3～100.1～0.5100100150100

　　測定范圍(ng)1～2000.5～15100～500200～800200～500200～600

　　批內(nèi)CV(%)3～94～83～563～71

　　批間CV(%)5～108～103～9106～76

　　正常值(g/L)1.0±0.21.5±0.21.2±0.21.2±0.11.2±0.21.7±0.2

　　P:多克隆抗體;M：單克隆抗體;RIA：放射免疫法;ELISA;酶聯(lián)免疫法;RID：單向免疫擴散法;INA：免疫散射比濁法;ITA：免疫透射比濁法。

　　(源自：劉秉文,，1995.)

　　表18-2 ApoAⅡ免疫測定法的比較

　　RIAELISAEIARIDINAITA

　　抗體PP,，MPPPP

　　靈敏度(g)0.5　2053020

　　測定范圍(ng)1～205～5030～6050～40050～90040～150

　　批內(nèi)CV(%)785555

　　批間CV(%)978-76

　　正常值(g/L)0.25±0.40.35±0.050.76±0.20.29±0.020.37±0.090.36±0.03

　　(源自：劉秉文，1995.)

　　表18-3 ApoAⅣ免疫測定法的比較

　　RIAELISAEIA

　　抗體PPP

　　靈敏度(g)50.220

　　測定范圍(ng)5～500.5～850～200

　　批內(nèi)CV(%)53.605

　　批間CV(%)789

　　正常值(g/L)0.17±0.030.14±0.050.14±0.04

　　(源自：劉秉文,，1995.)

　　表18-4 ApoB100免疫測定法的比較

　　RIAELISAEIARIDINAITA

　　抗體P,，MP，MPP,，MPP

　　靈敏度(n)5～102～2050～300300300300

　　測定范圍(ng)0～1002～1020～50050～600300～500100～500

　　批內(nèi)CV(%)4～84～71～73～74～72

　　批間CV(%)7～11103～106～77～82

　　正常值(g/L)0.9±0.20.85±0.10.6±0.30.8±0.20.8±0.20.8±0.3

　　(源自：劉秉文,，1995.)

　　表18-5 ApoCⅠ免疫測定法的比較

　　RIAELISAINA

　　抗體PPP

　　靈敏度(n)1550

　　測定范圍(ng)5～3015～100-

　　批內(nèi)CV(%)735

　　批間CV(%)958

　　正常值(g/L)0.05±0.030.06±0.0020.06±0.01

　　(源自：劉秉文，1995.)

　　表18-6 ApoCⅡ免疫測定法的比較

　　RIAELISAEIARIDITA

　　抗體PPPPP

　　靈敏度(g)100.3454010

　　測定范圍(ng)10～800.5～570～60040～60012～50

　　批內(nèi)CV(%)636.52.13.3

　　批間CV(%)1088.23.96.2

　　正常值(g/L)0.04±0.010.033±0.0080.04±0.0020.039±0.0170.04±0.01

　　(源自：劉秉文,，1995.)

　　表18-7 ApoCⅢ免疫測定法的比較

　　RIAELISAEIARIDINAITA

　　抗體PPPPPP

　　靈敏度(g)10.310762015

　　測定范圍(ng)2～201～620～8076～60050～40030～120

　　批內(nèi)CV(%)134.382.56.35.2

　　批間CV(%)134.383.56.35.2

　　正常值(g/L)0.15±0.060.16±0.030.12±0.040.127±0.0370.12±0.030.11±0.03

　　(源自：劉秉文,，1995.)

　　相關(guān)

　　二,、人血漿(清)載脂蛋白參考值比較

　　表18-8 ApoE免疫測定法的比較

　　RIAELISAEIARIDITA

　　抗體PP,，MPPP

　　靈敏度(n)0.2～80.520355

　　測定范圍(ng)0.8～1000.5～620～20050～30020～400

　　批內(nèi)CV(%)6485.92

　　批間CV(%)9857.25

　　正常值(g/L)0.05±0.020.04±0.010.10±0.040.035±0.010.04±0.01

　　(源自：劉秉文，1995.)

　　表18-9 國人血漿ApoAⅠ含量與國外報道的比較

　　作者發(fā)表時間方法例數(shù)性別年齡均值±s(mg/dl)

　　張祖輝1998RID307男20-77122.1±13.7

　　劉秉文　　318女20-77125.5±15.9

　　李鍵齋等1986EIA291男+女19-50119±17

　　周新等*1990EIA692男13-85129.1±16.1

　　477女18-80130.5±14.2

　　Albers等1976RID20男+女11.5±7.3115.7±7.3

　　Cheung等1977RID172男20-65120±20

　　188女20-65135±25

　　Reman等1978RID95男40-49137±23

　　104女40-49137±23

　　Schonfelcl等1974RIA41男13-58100±35

　　34女16-58104±34

　　Karlin等197623男20-39130±3

　　19女20-39154±6

　　Avogaro等1978EIA60男20-60128±22

　　60女20-60134±20

　　Mordasini等1980EIA50男20-60113±9

　　50女20-60125±17

　　Miller等1980EIA8男34-70122±27

　　8女52-68149±20

　　Rosseneu等1981IAN12男29139±15

　　14女30147±24

　　Assmann等1982INA3032男20-65136±23

　　1367女20-60146±25

　　(源自：劉秉文,，1995)

　　*：作者補充,。

　　表18-10 國人血漿ApoAⅡ含量與國外報道的比較

　　作者發(fā)表時間方法例數(shù)性別均值±s(mg/dl)

　　羅靜聰1988RID76男+女26.7±4.6

　　劉秉文1988ELISA41男+女24.2±5.9

　　胡維誠1987RID160男+女27.0±4.4

　　Curry等1976RID19男78.0±1.7

　　19女83.0±25

　　Cheung等1977RID172男33.0±5

　　188女36.0±6

　　Assmann等1977EIA15男34.1±5

　　15女38.3±5.5

　　Schonfeld等1977RLA29男+女40.5±8.9

　　Maupovic等1981ELA50男+女68.0±18

　　Goldberg等1980RIA50男25.0±1

　　50女26.0±1

　　De Backnev等1982INA70男+女43.0±6.9

　　Zech等1983RID27男+女24.0±0.6

　　Noma等1983RLA27男+女32.0±8.3

　　Nukita等1984EIA156男+女40.0±9

　　(源自：劉秉文，1995)

　　表18-11 國人血漿ApoB含量與國外報道的比較

　　作　者發(fā)表時間方法例數(shù)性別均值±s(mg/dl)

　　周新等1986EIA608男83.2±13.9

　　511女80.4±13.4

　　李健齋等1986EIA727男+女76±19

　　吳兆豐,、劉秉文1987RID304男87.9±14.4

　　320女86.7±14.4

　　Albers等1975RIA349男+女81.0±20

　　Bantorich等1975RIA82男+女90.0±24

　　Bedford等1976RIA128男+女87.0±30

　　Schonfeld等1974RIA42男+女83.0±16

　　Brussaard等1980EIA60男+女63±16

　　Fruchart等1981EIA144男+女90

　　Curry等1978EIA38男90±2.0

　　36女88±11

　　Curry等1978RID20男+女87±26

　　Lees等1970RID64男+女83±25

　　Snuderman等1975RID31男82±22

　　Fievet等1979INA206男129±31

　　271女120±34

　　Heuck等1979INA68男+女82.0±23

　　Rossenue等1981INA70男92±13

　　Durrington等1976INA29男+女85±11

　　(源自：劉秉文,，1995)

　　表18-12 國人血漿ApoCⅠ含量與國外報道的比較

　　作　者發(fā)表時間方法例數(shù)性別均值±s(mg/dl)

　　傅明德等1987ELISA202男7.6±2.5

　　214女8.0±2.3

　　Polz等1980RID10男+女6.9±2.0

　　Curry等1981ELA68男+女6.0±1.5

　　(源自：劉秉文，1995)

　　表18-13 國人血漿ApoCⅡ含量與國外報道的比較

　　作　者發(fā)表時間方法例數(shù)性別均值±s(mg/dl)

　　傅明德等1987ELISA202男5.2±1.9

　　241女4.9±1.8

　　范萍等1989RID67男+女3.9±1.7

　　Schonfeld等1979RIA93男+女3.9±1.4

　　Curry等1981EIA68男+女4.0±2.0

　　Kashyap等1977RIA32男+女5.0±0.4

　　(源自：劉秉文,，1995)

　　表18-14 國人血清ApoCⅢ含量與國外報道的比較

　　作者發(fā)表時間方法例數(shù)性別均值±s(mg/dl)

　　傅明德等1988ELISA134男11.6±3.6

　　135女12.0±3.7

　　范萍等1989RID67男+女12.7±3.7

　　劉秉文等1987IRA21男+女9.2±2.1

　　Schonfeld等1979RID93男+女15.4±6.2

　　Curry等1980ELA54男+女10.9±3.0

　　Kashyap等1981RIA29男+女11.1±0.9

　　(源自：劉秉文,，1995)

　　表18-15 國人血漿ApoE含量與國外報道的比較

　　作者發(fā)表時間方法例數(shù)性別均值±s(mg/dl)

　　劉銘鋒、劉秉文等1987ELISA42男+女3.57±1.24

　　劉銘鋒,、劉秉文等1987ELA50男+女4.70±1.18

　　劉銘鋒、劉秉文等1992RID116男3.95±0.98

　　122女4.00±1.32

　　張東升,、夏輝明1991ELISA25男+女3.45±1.24

　　Blum等1980RIA26男+女3.6±1.3

　　Gregg等1984RIA12男+女4.8±1.2

　　Wesgraber等1984RIA　男+女5(3.5-7.0)

　　(源自：劉秉文,，1995)

　　王抒、李健齋等于1996年報道283例血清各項載脂蛋白測定值及百分位數(shù),，如表18-16,、18-17、18-18所示,。這批數(shù)據(jù)是目前國內(nèi)采用同一份標本檢測脂質(zhì),、脂蛋白和載脂蛋白項目最多的1次報道。除了作為參考值供臨床應(yīng)用外,，并闡明了各項指標之間的相關(guān)性,。筆者予以抄錄，供參考,。

　　表18-16 血脂與脂蛋白水平(mmol/L)

　　項目男(225例)女(58例)P值

　　TC4.87±0.735.16±0.84<0.05

　　TG1.27±0.661.25±0.71>0.05

　　HDL-C1.41±0.351.54±0.36<0.02

　　HDL2-C0.56±0.170.63±0.19<0.02

　　HDL3-C0.86±0.230.91±0.19>0.05

　　LDL-C2.95±0.683.13±0.12>0.05

　　(源自:王抒,，1996)

　　表18-17 幾項常用比值*

　　項　目男女

　　LDL-C/HDL-C2.21±0.722.16±0.80

　　HDL2-C/HDL3-C0.66±0.120.69±0.15

　　ApoB/ApoAⅠ0.72±0.160.74±0.17

　　ApoAⅠ/ApoAⅡ4.10±0.654.10±0.68

　　ApocⅡ/ ApoCⅢ0.39±0.120.41±0.16

　　男女組間無顯著意義

　　(源自：王抒，1996)

　　表18-18 各項載脂蛋白測定值與百分位數(shù)

　　項目X±Sp5p25p50p75p95

　　男(225例)

　　ApoAⅠ(g/L)1.42±0.171.171.301.431.511.72

　　ApoAⅡ(g/L)0.36±0.660.280.320.350.400.46

　　ApoB(g/L)1.01±0.210.720.861.001.141.38

　　ApoCⅠ(mg/L)53±173143506083

　　ApoCⅡ(mg/L)34±161324314269

　　ApoCⅢ(mg/L)44±172634415174

　　ApoE(mg/L)44±172634415174

　　Lp(α)(mg/L)1441252653107185382

　　女(58例)

　　ApoAⅠ(g/L)1.45±0.141.211.341.441.551.74

　　ApoAⅡ(g/L)0.36±0.060.260.330.360.390.44

　　ApoB(g/L)1.07±0.230.710.901.081.201.49

　　ApoC(mg/L)53±183039516192

　　ApoCⅡ(mg/L)41±182028384977

　　ApoCⅢ(mg/L)104±405272100129184

　　ApoE(mg/L)51±183337485889

　　Lp(α)(mg/L)154±1163566117207464

　　國內(nèi)的已有報道表明,，人血清載脂蛋白參考值水平尚有一定的差異,。引起這種差異的原因是多方面的,，目前認為主要原因有：①檢測方法與儀器不同;②試劑質(zhì)量尤其是抗血清技術(shù)標準不統(tǒng)一;③國內(nèi)尚未采用完全符合國際標準的定值血清;④人群的生活習慣及種族差異。為此對于國人的血清載脂蛋白參考值的確立,，尚需付出艱辛的勞動,。