臨床上將C10以上的脂肪酸稱為游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)或非酯化脂肪酸(nonesterifiedfatty acid,NFFA),，正常血清中含有油酸(18:1,W9)占54%,，軟脂酸(16：0)占34%，硬脂酸(18：0)占6%,，是其主要的NFFA,。另外還有月桂酸(12：0)、肉豆蔻酸(14：0)和花生四烯酸(20：4,，W6,，9，12,，15)等含量很少的脂肪酸,。與其他脂質(zhì)比較，NFFA在血中濃度很低,，其含量水平極易受脂代謝,，糖代謝和內(nèi)分泌機(jī)能等因素影響，血中NFFA半壽期為1～2min,，極短,。血清中的NFFA是與清蛋白結(jié)合進(jìn)行運(yùn)輸，屬于一種極簡(jiǎn)單的脂蛋白,。

　　測(cè)定血清NFFA法有滴定法,。比色法，原子分光光度法,，高壓液相層析法和酶法等,。一般多以酶法測(cè)定。作NFFA測(cè)定的標(biāo)本一定要注意在4℃條件下分離血清并盡快進(jìn)行測(cè)定。因?yàn)檠杏懈鞣N脂肪酶存在,，極易也極快使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA,，使血中NFFA值上升。貯存標(biāo)本僅限于24h內(nèi),，若保存三天,，其值約升高30%，使結(jié)果不準(zhǔn)確,。

　　1.非酶法測(cè)定

　　非酶法測(cè)定包括滴定法,、比色法、原子吸收分光光度法和高壓液相層析法,。前三種方法準(zhǔn)確性差;高壓液相層析法，儀器太昂貴,，不便于批量操作,。

　　2.酶測(cè)定法

　　主要用脂肪酶測(cè)定。血清中游離脂肪酸可分別測(cè)定酶水解后的產(chǎn)物乙酰CoA或AMP或輔酶A(CoA)進(jìn)行定量,。酶法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠,，快速,，易于批量檢測(cè),。測(cè)定原理如圖15-6所示。

　　圖15-6 血清主要FFA酶法測(cè)定圖

　　□：內(nèi)物質(zhì)作為生成量與變化量進(jìn)行測(cè)定;ACS：乙酰CoA合成酶;MK：肌激酶;　PK：丙酮酸激酶;POD：丙酮酸氧化酶;DTNB：α-磺基苯甲酸;ACO：乙酰CoA氧化酶;ACD：乙酰CoA脫氫酶,。

　　一,、亮度法

　　1.原理

　　血清中游離脂肪酸經(jīng)抽提到高密度銅試劑中，形成銅皂在上層溶劑中,，再用二苯卡巴肼與銅顯色,，進(jìn)行定量。

　　2.試劑組成

　　代號(hào)種類濃度組成貯存2～8℃有效期

　　R-1抽提劑　氯仿：庚烷：甲醇=5：5：1(V/V)

　　R-2緩沖液33mmol/LKH2PO44.539g/L 100ml+Na2HPO4·2H2O5.983g/l 50ml調(diào)pH至6.4

　　R-3銅貯液500mmol/LCu(NO3)2·3H2o 12.07g加H2O→100ml

　　R-4三乙醇胺1.0mol/L三乙醇胺10ml,，加水→100ml

　　R-5NaOH液1mol/L

　　R-6銅試劑　R-3 10ml+R-4 10ml+R-6 6ml

　　+H2O→100ml調(diào)pH至8.1

　　R-7二苯卡

　　巴肼液　二苯卡巴肼(乙醇)液(4g/L)10ml+R-4 0.1ml　臨用前配制

　　R-8軟脂酸標(biāo)準(zhǔn)貯存液2mmol/L軟脂酸51.2mg溶于100ml R-1液冷藏

　　R-9R-8的應(yīng)用液500μmol/L用R-1液稀釋冷藏

　　3.操作

　　按圖15-7操作,。

　　4.計(jì)算

　　血清游離脂肪酸(μmol/L)=ESA/EST×500

　　二、酶法

　　1.原理

　　血清中游離脂肪酸或非酯化脂肪酸(NEFA),，經(jīng)酶試劑作用生成紫色化合物,，其顏色深淺與NEFA含量成正比。

　　2.試劑組成

　　代號(hào)種類組成濃度貯存貯存

　　R1緩沖液磷酸緩沖液

　　MgCl2液

　　去垢劑0.04mmol/LpH6.9

　　3mol/L

　　R2酶/輔酶乙酰CoA合成酶

　　抗壞血酸氧化酶

　　CoA

　　ATP

　　4-AAP

　　溶于10ml R1液中≥0.3U/ml

　　≥1.5U/ml

　　0.9mmol/L

　　5.0mmol/L

　　1.5mmol/L冷藏5日

　　R3酶稀釋液苯氧乙醇

　　去垢劑0.3%(V/V)

　　R4　馬來(lái)酰亞胺

　　該試劑與R3等體積混合10.6mmol/L

　　R5酶試劑乙酰CoA氧化酶

　　過氧化物酶

　　TOOS

　　混合上述試劑,，再等體積R4試劑混合≥10U/ml

　　7.5U/ml

　　0.2mmol/L冷藏5日

　　R6標(biāo)準(zhǔn)液　1mmol/L冷藏

　　*應(yīng)用帶玻塞離心管

　　3.操作

　　按圖15-8操作,。

　　4.計(jì)算

　　圖15-7 血清非酯化脂肪酸測(cè)定(光度法)操作圖

　　圖15-8 血清非脂化脂肪酸測(cè)定(酶法)操作圖

　　(胡漢寧　儲(chǔ)建中)