磷脂(PL)并非單一的化合物,，其分子內(nèi)含有磷酸基的多種脂質(zhì),，磷脂是這一類物質(zhì)的總稱。血中PL包括：①卵磷脂占60%和溶血卵磷脂占2%～10%;②磷脂酰乙醇胺等，占2%;③鞘磷脂,，占20%,。

　　血清PL定量方法包括測定無機磷的化學(xué)法和酶法兩大類。

　　1.化學(xué)測定法過程包括：①抽提分離;②灰化;③顯色,、比色的三個階段,。

　　2.酶測定法

　　可分別利用磷脂酶A、B,、C,、D等4種酶作用，加水分解,，測定其產(chǎn)物，對PL進行定量,。一般多采用磷脂酶D(PL-D)進行定量,。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含膽堿的磷脂,，這三種磷脂約占血清總磷脂的95%,。本法快速準(zhǔn)確，便于自動生化分析儀器進行批量檢測,。

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　　一,、化學(xué)法(消化法)

　　1.原理

　　以有機混合試劑(無水乙醇、乙醇)抽提血清中磷脂,，再用濃硫酸和過氯酸消化抽提液中的脂類和其他有機化合物,，用硝酸鹽與磷反應(yīng)生成有色化合物，比色定量,。本法可用組織細(xì)胞磷脂的抽提定量,。

　　2.試劑組成

　　代號種類濃度組成貯2～8℃有效時間

　　R-1抽提液　無水乙醇：乙醇=3:1

　　R-2消化液　用1L密器，加水約500ml,，置冷水中緩緩加濃硫酸280ml到水中,，冷卻后加過氯酸(70%，AR)65ml,，混勻,，加蒸餾水至1000ml

　　R-3顯色劑　鉬酸銨(A.R)2.5g+無水醋酸鈉8.2g，加蒸餾水溶解并稀釋至1L,，監(jiān)用時取此液體9份加新配的VitC液(10%)1份,，混合即可

　　R-4參考液(貯存液)1mg/L　稱干燥KH2PO(A.R)0.4393g,溶于蒸餾水中，轉(zhuǎn)移至100ml的容量中,，用蒸餾水加至刻度,。　冷藏

　　R-5參考應(yīng)用液0.04mg/ml取貯存液2ml加至50ml容量中,，加水至刻度　冷藏

　　3.操作

　　按圖15-5操作,。

　　4.計算

　　血清脂性磷濃度=ESA/EST×10(mg/dl)

　　血清磷脂(以卵磷脂計)=ESA/EST×10×0.3229(mmol/L)

　　圖15-5 血清磷脂測定(消化法)操作圖*采用帶塞玻璃試管

　　相關(guān)

　　二,、酶法

　　1.原理

　　磷脂酶D因特異性不高，能水解血清中卵磷脂,，溶血卵磷脂和神經(jīng)磷脂(三者占血清總磷脂的95%),，釋放出膽堿，膽堿在膽堿氧化酶作用下生成甜菜堿和H2O2,，在過氧化物酶作用下,，H2O2，4-氨基安替比林,、酚發(fā)生反應(yīng)生成紅色醌亞胺化合物,，其顏色深淺與這三種磷脂的含量成正比，在500nm波長下比色計算結(jié)果為：

　　2.試劑

　　(1)酶應(yīng)用液(參考配方)：每100mlTris-His緩沖液(50mmol/L,，pH7.8)中含：

　　磷脂酶D45U

　　膽堿氧化酶100U

　　過氧化物酶220U

　　4-氨基安替比林12mg

　　酚20mg

　　CaCl2·2H2O8mg

　　TritonX-1000.2g

　　(2)標(biāo)準(zhǔn)液：純卵磷脂,，臨用前配制，5mg/2.5ml蒸餾水(含TritonX-1000.5%)

　　3.操作

　　(1)標(biāo)本采集：空腹12h抽靜脈血,，不抗凝,，分離血清或抗凝血分離血漿。

　　(2)在3.0ml酶應(yīng)用液中加入血清(漿)20μl,，標(biāo)準(zhǔn)管加標(biāo)準(zhǔn)液20μl,，空白管加水20μl，放置37℃水浴10min后,，波長500nm,，比色，空白管液調(diào)零,。

　　4.計算

　　血清磷脂(mg/dl)=TA/SA×200

　　血清磷脂(mmol/L)=血清磷脂(mg/dl)×0.01292