為了體外研究脂蛋白的細(xì)胞代謝和脂蛋白受體活性,，早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纖維細(xì)胞125I標(biāo)記LDL的配體-受體結(jié)合分析法。其基本原理是：用放射性同位素(常用125I)標(biāo)記LDL后,，與細(xì)胞(通常為培養(yǎng)的單層成纖維細(xì)胞),、組織或含有LDL-R的制劑一起孵育，使LDL-R與125I-LDL充分結(jié)合,，形成受體-配體復(fù)合物,，再除去未結(jié)合的125I-LDL，測(cè)定結(jié)合沉淀物中的放射性,。同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞,、組織或受體制劑的蛋白質(zhì)含量，即可計(jì)算出與125I-LDL結(jié)合的LDL-R量,。本法由于使用同位素,，采樣困難和操作過(guò)程繁瑣，且費(fèi)時(shí),、昂貴,，故在臨床診斷上難以廣泛開展。

　　Teupser等于1996年建立了直接熒光法檢測(cè)LDL-R,，他們采用1,，1’二(十八烷基)-3,，3'，3',，3'-四甲基吲哚羰基花青高氯酸鹽(1,1'-dioctadecy1-3,3,3',，3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI)標(biāo)記LDL，原理與同位素標(biāo)記LDL相同,。其操作步驟見圖20-1,。直接熒光法可定量檢測(cè)附著的或非附著的各種類型的培養(yǎng)細(xì)胞(如正常人或FH病人的皮膚成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、人U-937和鼠P388D1巨噬細(xì)胞系)的LDL-R和清道夫受體,，其特點(diǎn)是特異性強(qiáng)，靈敏度高,，不使用有機(jī)溶劑,、不需預(yù)先進(jìn)行脂質(zhì)抽提,，并省去了多步抽提步驟,。正常人平均最大結(jié)合濃度為10.3±1.1μg/mg細(xì)胞蛋白，F(xiàn)H雜合子為5.2±0.8μg/mg細(xì)胞蛋白,，F(xiàn)H純合子0.9±0.2μg/mg細(xì)胞蛋白,。

　　圖20-1 直接熒光法測(cè)LDL-R操作步驟

　　亦有用膠體金標(biāo)記LDL的，但是在受體-配體結(jié)合分析法中,，正常人與FH患者的測(cè)定值有較明顯的交叉現(xiàn)象,，且操作比較繁瑣。

　　1987年Roach等比較了在硝化纖維素上用125I-LDL,、生物素-LDL,、生物素-LDL、膠體金-LDL和膠體金-LDL結(jié)合銀染四種方法檢測(cè)LDL-R,，發(fā)現(xiàn)膠體金-LDL結(jié)合銀染的方法最為敏感,，且安全、簡(jiǎn)單,、快速,、便宜。比較結(jié)果見表20-1,。

　　表20-1 硝化纖維上檢測(cè)LDL-R的幾種方法比較

　　因素125I-LDL生物素-LDL膠體金-LDL膠體金-LDL加銀染

　　時(shí)間12～24h3h5～10min20min

　　敏感性1.6fmoles1.6fmoles1.6fmoles193amoles

　　線性范圍0.5～15μg0.5～4μg0.5～4μg0.06～2μg