第十五章 血清脂類測定
《動脈粥樣硬化》
血漿中的脂類包括膽固醇,、膽固醇脂,、甘油三酯、磷脂和非酯化脂肪酸等,。
目前,,對有關(guān)脂類代謝疾患的診斷和治療過程,均必須檢測血漿(清)中的脂類,,通過其含量的變化,,對臨床疾患提供協(xié)助診斷的依據(jù)。有關(guān)醫(yī)學(xué)科研工作,,脂類的定量檢測也是一項必備的研究項目,。
1.膽固醇測定
血漿中膽固醇及其酯的含量檢測,從方法學(xué)上可分為兩大類:一類是化學(xué)法包括抽提法和直接測定法,這類方法目前仍在沿用;另一類是酶法測定,,方法敏感特異快速,,并能自動化分析,已常規(guī)應(yīng)用,?;瘜W(xué)測定法種類多,由于顯色反應(yīng)的特異性不同,,其結(jié)果有一定的差異,。目前公認的參考方法是Abell-Kendall(L-B反應(yīng))法。另外,,三氯化鐵-硫酸反應(yīng)法(Zak法)具有顯色穩(wěn)定法,、操作簡便、靈敏度約5倍于L-B反應(yīng)法,,膽固醇酯與游離膽固醇顯色程度比較接近等優(yōu)點,,缺點是特異性差,干擾因素比L-B法多,,如冰醋酸中含有的乙醛酸,,血清樣品中的血紅蛋白,膽紅素以及硫酸的質(zhì)量等因素均可影響Zak方法的準(zhǔn)確性,,Zak法更適合于科研使用,。酶法測定血清膽固醇的方法已被廣泛采用,國產(chǎn)試劑已能滿足臨床的需要,。膽固醇測定用的標(biāo)準(zhǔn)品,,按美國國家標(biāo)準(zhǔn)局(NBS)出品純度達99.8%,是國際公認的參考物,國內(nèi)李健齋等已純化制成符合這一要求的膽固醇純品,,已供臨床檢測血清膽固醇使用,。
2.甘油三酯測定
血漿甘油三酯的測定,目前多以化學(xué)法和酶法定量,?;瘜W(xué)法測定甘油三酯是以脂蛋白變性,水解成甘油,,并以甘油為計算依據(jù),。酶法是以特異酶水解甘油三酯,,除去脂肪酸,,再測定甘油,方法特異,,準(zhǔn)確而快速,,臨床廣為應(yīng)用。目前甘油三酯測定的方法主要以定量甘油為依據(jù),,然而血清樣品中存在有游離甘油,,如何從反應(yīng)過程中的總甘油中減去游離甘油,,多年來一直在研究討論這一問題。若不減去,,其測定值將會高于血清樣品中的真值,,如果要減去,就必須先測出血清樣品中的游離甘油,,甘油三酯的測定方法將增加一個繁雜的步驟,,實際工作中難以做到。有報道血清樣品中的游離甘油實際量是0.07~0.13mmol/L,,相當(dāng)于甘油三酯的0.5~6.0mmol/L,,為此建議,實測的甘油三酯量減去一個校正系數(shù)即:
甘油三酯(mmol/L)=[0.98×總甘油(mmol/L)]-0.07(mmol/L),。
這一校正系數(shù)也僅適用于健康人,,對臨床病人并不一定適用。據(jù)報道,,血清樣品的游離甘油一直是個未知數(shù),,無法測準(zhǔn)。為此,,目前臨床測定血清甘油三酯時,,基本上未考慮游離甘油,因為其含量很少,,暫且忽略不記,。甘油三酯測定的參考物,推薦三油酸甘油酯和三軟脂酸甘油酯混合物(2:1,,W/W),,此參考物適用于化學(xué)法。在酶法測定中,,仍以高純度的三油酸甘油酯為參考物,。
3.磷脂測定
血清磷脂包括卵磷脂、溶血卵磷脂,、神經(jīng)磷脂,、腦磷脂和其他少量磷脂。如需要分別檢測各種磷脂,,可以通過薄層層析法,、柱層析法和高壓液相色譜法。目前,,臨床僅測定血清磷脂總量,。血清磷脂總量的測定方法有化學(xué)方法和酶法兩大類。化學(xué)法是以磷脂中的磷為定量依據(jù),,因為每磷脂分子中都含有一個磷酸根,,故將磷脂的磷稱為脂性磷。由于血清中磷脂大部分為卵磷脂,,其分子量中磷約占4%,,故將脂性磷換算成磷脂的系數(shù),一般為25,。由于化學(xué)法均需要抽提,,再測抽提液中的磷脂的磷,血清中的磷酸鹽不可能混入抽提液中,,因此血清中的磷酸鹽對磷脂測定的干擾很少,。酶法是利用磷脂酶進行定量測定。生物體中磷脂酶包括磷脂酶A1,、A2,、C和D四種。磷脂酶D特異性差,,均可水解卵磷脂,、溶血卵磷脂和神經(jīng)磷脂,三者約占血清總磷脂的95%,,臨床多用含磷脂酶d 的試劑進行磷脂的定量測定,。
4.游離脂肪酸測定
游離脂肪酸屬于未酯化的一類脂肪酸,故又稱為非酯化脂肪酸,,其量很少,,采用方法必須是靈敏的方法,還需要避免脂肪水解產(chǎn)生脂肪酸的干擾,。測定方法有:①滴定法需要微量滴定裝置,,因為要通過肉眼觀察顏色,難免會有主觀因素的影響,,所以難以測定準(zhǔn)確,,很難用于常規(guī);②光度法,以銅皂法常用;③酶法,,主要采用特異性不強的脂肪酶D進行檢測,,方法特異,快速準(zhǔn)確,,已常規(guī)應(yīng)用于臨床,。
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